我們通過(guò)核酸檢測(cè)才能檢測(cè)出身體內(nèi)部的基因序列有沒有問(wèn)題，現(xiàn)在核酸檢測(cè)的方法是pcr核酸檢測(cè)，這種方法是什么意思，主要檢測(cè)手段是什么，大概幾天出結(jié)果。

pcr核酸檢測(cè)是什么意思

PCR的意思是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，能夠用來(lái)擴(kuò)增DNA，從而將微量的DNA擴(kuò)增到能夠檢測(cè)的程度。有些病毒的核酸是DNA，需要采用這個(gè)方法進(jìn)行檢測(cè)。所以PCR并不是進(jìn)行的檢查，而是檢測(cè)DNA的一種方法。比如乙肝病毒DNA定量，用的就是這一種方法。檢查DNA的目的，一方面是可以診斷疾病，如果連病原體的DNA都能檢測(cè)到，就說(shuō)明感染了這種病原體;另一方面是判斷病毒復(fù)制的多少，從而判斷病情嚴(yán)重程度或者治療效果。

pcr核酸檢測(cè)方法與步驟

進(jìn)行核酸檢驗(yàn)，需要經(jīng)過(guò)取樣、留樣、留存、核酸提取、上機(jī)檢測(cè)五個(gè)步驟。

核酸檢測(cè)的第一步就是采集人體分泌物，用鼻試子或咽試子擦拭鼻腔或咽后壁及雙側(cè)咽扁桃體處。

第二步醫(yī)務(wù)人員進(jìn)行留樣，將試子頭浸入細(xì)胞保存液中，折斷尾部后立即旋緊管蓋。

第三部要將樣本放入密閉袋中，保存好并及時(shí)送檢。

第四步將樣本送進(jìn)實(shí)驗(yàn)室，提取核酸。

第五步，將提取物進(jìn)行熒光PCR擴(kuò)增反應(yīng)。

pcr核酸檢測(cè)要多久出結(jié)果

核酸檢測(cè)操作過(guò)程需要幾個(gè)小時(shí)，一般1-2天出結(jié)果。目前新冠病毒的核酸檢測(cè)主要是使用RT-PCR法檢測(cè)試劑盒，操作是：1、檢測(cè)人員先用核酸提取試劑盒提取患者標(biāo)本里的核酸。2、把提取到的核酸放進(jìn)檢測(cè)試劑中復(fù)制。3、結(jié)果判定。第1步和第2步都有嚴(yán)格的操作流程和操作條件，整體耗時(shí)在1-4小時(shí)之間，最后判定結(jié)果。醫(yī)院的檢測(cè)是上午統(tǒng)一上機(jī)，到統(tǒng)一出結(jié)果差不多5個(gè)小時(shí)，也就到了下午，然后統(tǒng)一上報(bào)，不會(huì)隨到隨檢。所以下午或晚上所送的標(biāo)本是第2天做，有的醫(yī)院自己不具備實(shí)驗(yàn)室條件，不能做，需送到上一級(jí)實(shí)驗(yàn)室做，保守估計(jì)時(shí)間是1-2天。

什么是實(shí)時(shí)熒光RT-PCR

所謂RT-PCR 就是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的擴(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。

① 提取病毒的RNA

先從樣本中提取出病毒的RNA。具體來(lái)說(shuō)，就是在樣本中加入核酸提取試劑，把病毒破壞，讓核酸釋放出來(lái)。

② 把病毒RNA“反轉(zhuǎn)錄”成cDNA

通過(guò)反轉(zhuǎn)錄技術(shù)(RT)，把病毒的RNA“反轉(zhuǎn)”成一種特異DNA，即cDNA(因?yàn)椴《綬NA結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，所以把病毒RNA轉(zhuǎn)換成穩(wěn)定的cDNA會(huì)更方便檢測(cè))

這里會(huì)用到核酸檢測(cè)試劑盒中一種叫“反轉(zhuǎn)錄酶”的物質(zhì)。而完成轉(zhuǎn)錄后，所有工作都將圍繞cDNA展開。

③ 進(jìn)行cDNA的擴(kuò)增與檢測(cè)

簡(jiǎn)單說(shuō)就是擴(kuò)增cDNA的數(shù)量。這里應(yīng)用的就是PCR，全稱聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。具體來(lái)說(shuō)，就是借助試劑盒中一些特殊物質(zhì)，讓cDNA不斷復(fù)制，使其數(shù)量呈指數(shù)式增長(zhǎng)。

當(dāng)cDNA擴(kuò)增的同時(shí)，試劑盒中還有一種叫熒光探針的東西同時(shí)工作。它會(huì)釋放熒光信號(hào)，cDNA每完成一次擴(kuò)增，熒光信號(hào)就會(huì)增加一點(diǎn)，而PCR檢測(cè)儀就能記錄到一個(gè)熒光信號(hào)增加的Ct值。

④ 出結(jié)果

這一步就是根據(jù)檢測(cè)儀記錄的Ct值，進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果分析。

理想狀態(tài)下，如果樣本中有新冠病毒，那么在cDNA完成預(yù)訂次數(shù)的擴(kuò)增后，檢測(cè)儀記錄的Ct值就會(huì)形成一個(gè)逐漸上升的S形曲線，檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性;如果沒有類似的S型曲線，檢測(cè)結(jié)果就為陰性。

做完以上所有工作，通常需要4~6小時(shí)。